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小鼠的海馬神經(jīng)元細(xì)胞HT22培養(yǎng)操作規(guī)程

更新時(shí)間:2023-06-16 瀏覽次數(shù):1894

  小鼠的海馬神經(jīng)元細(xì)胞HT22培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考:
 
  一、小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞(HT22)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
  1、準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
  2、培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
  3、凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
 
  二、細(xì)胞處理:
  1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

  三、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入2ml此細(xì)胞的全培養(yǎng)基終止消化。
  (3)輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
  (4)移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
  3、小鼠的海馬神經(jīng)元細(xì)胞HT22細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
 
小鼠的海馬神經(jīng)元細(xì)胞HT22

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